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  • ISSN 1006-3080
  • CN 31-1691/TQ

林可链霉菌噬菌体φSL60启动子的克隆与鉴定

张长生

张长生. 林可链霉菌噬菌体φSL60启动子的克隆与鉴定[J]. 华东理工大学学报(自然科学版), 1998, (4): 415-421.
引用本文: 张长生. 林可链霉菌噬菌体φSL60启动子的克隆与鉴定[J]. 华东理工大学学报(自然科学版), 1998, (4): 415-421.

林可链霉菌噬菌体φSL60启动子的克隆与鉴定

基金项目: 

国家自然科学基金

  • 摘要: 以启动子探针质粒pIJ486为载体,变铅青链霉菌(S.lividans)TK23作受体,克隆了林可链霉菌噬菌体SL60DNA上的启动子活性片段。以pUC18为载体构建SL60DNA之KpnI片段的基因文库,从中筛选出两个片段,分别克隆于pIJ486中获得pUIS29和pUIS198,在MM培养基上,两者的转化子对卡那霉素的抗性均仅为10mg/L。噬菌体SL60DNA的BglI片段直接克隆入pIJ486的BamHI位点,获得重组质粒pMMS1,其转化子的卡那霉素抗性在MM培养基上可达250mg/L。分析表明pMMS1上的插入片段约为920bp,含有一个SstI位点,四个MboI位点。该片段用MboI部分酶解缩小到600bp,亚克隆入pIJ486中得到重组质粒pMSB14,其转化子对卡那酶素的抗性水平提高到300mg/L。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,pMSB14中的neo基因可以表达出氨基糖苷磷酸转移酶(APHI蛋白)。这些结果表明pMSB14中的插入片段可能具有较强的启动子活性。

     

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