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  • ISSN 1006-3080
  • CN 31-1691/TQ

三相分离甾短杆菌胆固醇氧化酶及其性质

王龙刚 梁爽 王武

王龙刚, 梁爽, 王武. 三相分离甾短杆菌胆固醇氧化酶及其性质[J]. 华东理工大学学报(自然科学版), 2007, (2): 190-194210.
引用本文: 王龙刚, 梁爽, 王武. 三相分离甾短杆菌胆固醇氧化酶及其性质[J]. 华东理工大学学报(自然科学版), 2007, (2): 190-194210.
WANG Long-gang, LIANG Shuang, WANG Wu. Purification and Properties of a Cholesterol Oxidase from Brevibacterium sp. by Three-Phase Partitioning[J]. Journal of East China University of Science and Technology, 2007, (2): 190-194210.
Citation: WANG Long-gang, LIANG Shuang, WANG Wu. Purification and Properties of a Cholesterol Oxidase from Brevibacterium sp. by Three-Phase Partitioning[J]. Journal of East China University of Science and Technology, 2007, (2): 190-194210.

三相分离甾短杆菌胆固醇氧化酶及其性质

Purification and Properties of a Cholesterol Oxidase from Brevibacterium sp. by Three-Phase Partitioning

  • 摘要: 三相分离(TPP)是将硫酸铵与叔丁醇混合后形成有机相、中间沉淀相和水相。在20°C,调节发酵上清液的pH至6.0,加入硫酸铵使终浓度为400 g/L,溶解后加入与上清液等体积的叔丁醇,静置1 h分相,胆固醇氧化酶在有机相和水相之间形成蛋白沉淀,12 000 r/min离心10 min收集中间蛋白相,用pH 7.5,10 mmol/L的磷酸缓冲液溶解。结果表明:利用三相分离技术从乳化体系中分离纯化胆固醇氧化酶,比酶活提高了3.49倍,收率达93%。回收的酶液进一步经过DEAE-Sepharose Fast Flow纯化,比酶活从3.56 U/mg提高到30.15 U/mg。该酶最适反应温度为60°C,最适反应pH为7.5,酶的等电点为8.5,该酶在37°C,pH 6.0~8.0较为稳定。Hg2 和Ag 离子完全抑制胆固醇氧化酶的活性。

     

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  • 收稿日期:  2006-06-28

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