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  • ISSN 1006-3080
  • CN 31-1691/TQ

大肠杆菌caiE基因的克隆与高效表达

范立强 袁勤生 吴祥甫

范立强, 袁勤生, 吴祥甫. 大肠杆菌caiE基因的克隆与高效表达[J]. 华东理工大学学报(自然科学版), 2002, (2): 149-152.
引用本文: 范立强, 袁勤生, 吴祥甫. 大肠杆菌caiE基因的克隆与高效表达[J]. 华东理工大学学报(自然科学版), 2002, (2): 149-152.
FAN Li qing 1, YUAN Qin sheng 1*, WU Xiang fu 2. Cloning and Expression of Escherichia coli caiE Gene[J]. Journal of East China University of Science and Technology, 2002, (2): 149-152.
Citation: FAN Li qing 1, YUAN Qin sheng 1*, WU Xiang fu 2. Cloning and Expression of Escherichia coli caiE Gene[J]. Journal of East China University of Science and Technology, 2002, (2): 149-152.

大肠杆菌caiE基因的克隆与高效表达

Cloning and Expression of Escherichia coli caiE Gene

  • 摘要: 用聚合酶链反应(PCR)从大肠杆菌K12s中扩增大肠杆菌肉碱代谢相关酶基因cai E,将其克隆到克隆载体pBluescripy SK中,测序表明:该基因有612bp,与文献报道相比,有10个核苷酸不同,相应的翻译氨基酸有6个相异,将该基因重组到ColE1为复制子,T7为启动子控制下的分泌型表达载体pET-22b( )中,构建表达质粒pETCaiE,重组到载体pACYC184中构建以p15A为复制子,Lac为启动子的表达质粒pACYC-CaiE;重组到载体pWSK129中,构建以pSC101为复制子,T7为启动子的表达质粒pSC-CaiE。上述表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经1mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后,均可表达,SDS-PAGE分析表明表达蛋白分子质量约26ku,表达量占菌体总蛋白质的比例分别为pETCaiE30%,pACYC-CaiE8%,pSC-CaiE5%。

     

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