B淋巴细胞刺激因子基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达
Cloning and High-Level Expression of B Lymphocyte Stimulator(Blys) in E. Coli
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摘要: 聚合酶链式反应(PCR)扩增获得了编码BLys(134—285AA)的cDNA片段,该片段以限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ双酶切插入pET32a载体。测序表明除(ATA^263→ATG^263)突变并导致了氨基酸(1263M)突变外,其余序列与Genbank报道的序列一致。蛋白表达用异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,SDS—PAGE表明:在33ku处有明显的融合蛋白表达,其表达水平高达总茵体蛋白的50%。点印迹证实融合蛋白能与anti—His6Tag抗体反应。生物学活性研究表明BLys协同丝裂霉素能明显地抑制HeLa细胞的生长。