改进的PCR法克隆带小棒链霉菌cefD基因
Cloning of S.clavuligerus cefD Gene by Improved PCR
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摘要: 以GC含量高达74%的带小棒链霉素(S.clavuligerus)染色体DNA为模板,从引物设计、退火温度、有机辅剂及DNA聚合酶等方面改善PCR反应体系和扩增条件,成功地克隆得到了异青霉素异构酶的cefD基因。改进后的PCR体系中ψDMSO=0.05并加入适量的TaqDNA聚合酶,退火温度比常规选选择高一些,从而克服了常规PCR法扩增链霉菌基因遇到的二级结构复杂、引物与模板难以配对及引物间的引物内部易形成碱基配对等问题。改进后的PCR法提高了链霉菌基因克隆的效率,也可以广泛应用于高GC含量目的的基因的快速扩增。